Сортування є одним з елегантних варіантів застосування проточно-цитометричної технології, який привертає все більше уваги з боку різних галузей медицини, біології та промисловості. Ця технологія дає потужний та, поки, унікальний інструмент для швидкої ізоляції чистих популяцій клітин або часток з заданим набором біологічних характеристик. З такими популяціями надалі можуть проводитися морфологічні або генетичні дослідження, а також функціональні аналізи.
У минулому цю технологію було розроблено для того, щоб полегшити сортування клітин та інших часток. Вона швидко потрапила до уваги імунологів для забезпечення очистки субпопуляцій лімфоцитів. З того часу область її використання значно розширилася, та на сьогодні вона застосовується, починаючи з екологічного моніторингу і закінчуючи промисловим виробництвом ферментів. Неможливо детально описати кожну з областей застосування цієї технології. Незважаючи на це, нижче наводиться перелік методик, які наочно показують універсальність проточного сортування:
Одиничне клітинне клонування клітин гібридоми у виробництві моноклональних антитіл
Сортування клітин попередників у «полюванні» на поліпотентні стовбурові клітини
Очистка різних клітинних ліній, включаючи стовбурові клітини, зі зразків кісткового мозку
Сортування трансфектантів у межах маркеру експресії, такого, як зелений флуоресцентний білок
Мультипараметрична ізоляція клітин зі змішаних популяцій
Сортування сперматозоїдів по різниці ДНК, що містять хромосоми «Х» та «У»
Одиничне клітинне сортування для клоно-генетичних аналізів
Принципи
Існує два методи сортування часток за допомогою проточного цитометра: електростатичний та механічний. При електростатичному методі частки викидаються через випускний отвір та за рахунок вібрації на випускному отворі розбиваються на потік крапель стандартного розміру. Краплі, які містять частки, що цікавлять, можна відхиляти від основного крапельного потоку, створюючи заряд для даних часток. При механічному методі, частки, що цікавлять, відхиляються всередині проточної кювети, або шляхом переміщення пробірки - «уловлювача» у потік, чи шляхом їхнього відхилення у нерухому пробірку за рахунок акустичного імпульсу. Сортери виробництва PARTEC використовують механічний метод сортування клітин, який має низку переваг над електростатичним методом, серед яких важливими є біологічна безпека цього методу, оскільки сортувальний модуль є повністю закритою системою, та надійність роботи приладу, оскільки відсутня можливість засмічення випускного отвору.
PPCS – це повністю закритий кварцовий пристрій з сортувальним каналом 200 мкм для клітин розміром до 60 мкм. Однак опційно доступні інші розміри сортувального каналу. Опційно клітинними сортерами PPCS може бути оснащено всі проточні цитометри серії PAS та CyFlow (за виключенням моделі CyFlow ML).
Спеціальна конструкція приладу виключає можливість контамінації довкілля
Плавний процес сортування дозволяє отримати неушкодженими навіть тендітні клітини та великі частки
