K-Ras/B-Raf Набір для аналізу мутацій / КОЛОРЕКТАЛЬНИЙ РАК
Ген
KRAS кодує малу
GTPазу, що відіграє
провідну роль в передачі сигналу від рецептору до епідермального
ростового фактору (EGFR) до
подальших ефекторів. KRAS мутації
загалом виявляють у кількох типах пухлин лбюдини, таких як
метастатичний колоректальний рак (mCRC),
аденокарцинома легенів та рак щитовидної залози.
Найчастіше мутації знаходять в кодонах 12,
13 та 61. Де-які
дослідження демонстрували, що пухлини, які мали будь-яку з мутацій
гену KRAS гірше
відповідали на анти-EGFR антитільну
терапію. Американська Асоціація Клінічної
Онкології (ASCO)
нещодавно випустина свій перший Provisional
Clinical Opinion
(PCO), що
пропонує всіх пацієнтів, яким має бути призначена анти-EGFR
моноклональна антитільна терапія (на приклад cetuximab,
panitumumab або
erlotnib) слід
скринінгово обстежити на наявність KRAS
мутацій. Окремі дослідження також показали, що не всі mCRC
пацієнти з диким типом KRAS
пухлин відповідають на анти-EGFR
терапію. Це є підставою припустити, що додаткові гени та/або
механізми можуть бути залучені до механізмів резистентності до цих
препаратів. Мутації в BRAF,
інший ланцюговий ефектор EGF-активованого
патогенезу, було виявлено у 8%
mCRC пухлин.
Обстеження mCRC
пацієнтів показали резистентність до анти-EGFR
терапії у пацієнтів з пухлинами, що експресують
мутований BRAF. Таким
чином для окремих пацієнтів навіть було встановлено скорочення
періоду непрогресії (PFS) та
загального періоду виживання (OS)
при лікуванні антагоністами EGFR. Ці
дані є підставою наполегливо рекомендувати скринінг обох KRAS
та BRAF мутацій,
як необхідний захід для точного визначення пухлинних клітин, що не
будуть відповідати на терапію анти-EGFR.
Цей
набір визначає такі мутації в KRAS:
Екзон
Мутація
Зміна
нуклеотиду
Зміна
амінокислоти
COSMIC
ID
2
G12D
c.35G>A
Гліцин
(G)
на
Аспартат
(D)
521
G12C
c.34G>T
Гліцин
(G)
на
Цистеїн
(C)
516
G12S
c.34G>A
Гліцин
(G)
на
Серін
(S)
517
G12R
c.34G>C
Гліцин
(G)
на
Аргінін
(R)
518
G12A
c.35G>C
Гліцин
(G)
на
Аланін
(A)
522
G12V
c.35G>T
Гліцин
(G)
на
Валін
(V)
520
G13D
c.38G>A
Гліцин
(G)
на
Аспартат
(D)
532
3
Q61H
c.183A>C
& c.183A>T
Глутамін
(Q)
to
Гістидін
(H)
554
& 555
Q61L
c.182A>T
Глутамін
(Q)
на
Леуцин
(L)
553
Q61R
c.182A>G
Глутамін
(Q)
на
Аргінін
(R)
552
4
K117N
c.351A>C
& c.351A>T
Лізин
(K)
на
Аспарагін
(N)
19940
& 28519
K117R
c.350A>G
Лізин
(K)
на
Аргінін
(R)
1178068
K117E
c.349A>G
Лізин
(K)
на
Глутамат
(E)
1360831
A146T
c.436G>A
Аланін
(A)
на
Треонін
(T)
19404
A146P
c.436G>C
Аланін
(A)
на
Пролін
(P)
19905
A146V
c.437C>T
Аланін
(A)
на
Валін
(V)
19900
Та
BRAF:
Екзон
Мутація
Зміна
нуклеотиду
Зміна
амінокислоти
COSMIC
ID
15
V600E
c.1799T>A
Валін
(V)
на
Глутамат
(E)
476
Для
розширеного покриття, RAS c.59/117
Набір для визначення мутацій визначає
KRAS c.59, NRAS
c.59/117 соматичні
мутації.
Процедура
та аналіз
EntroGen
KRAS/BRAF
мутаційна панель це дослідження, що базується на ПЛР та використовує
аллель-специфічні зонди для ідентифікації наявності мутацій в KRAS
екзонах 2, 3 та 4, а також BRAF
V600E.
Процедура аналізу складається з 4 простих кроків:
Ізоляція
ДНК з біопсії пухлини (фіксовані у формаліні, залиті у парафін
зразки) або з свіжих заморожених зразків
Ампліфікація
регіонів
KRAS та
BRAF генів
з використанням аллель-специфічних зондів.
Визначення
ампліфікованого продукту за допомогою ампліфікатора у реальному часі
або з використанням гель-документації.
Документація
та тлумачення тесту.
Тест
може бути виконано лише за 2 години, починаючи від ізоляції ДНК до
отримання результату.
Обладнання
та матеріали
EntroGen
KRAS/BRAF
набір для визначення мутації потребує ПЛР ампліфікатора у реальному
часі, налаштованого на детекцію FAM
та VIC
флуоресцентних зондів.
Набір
включає реагенти, необхідні для ПЛР ампліфікації і детекції, а також
контролі для валідації реакції. Колонки та реагенти для ізоляції ДНК
до складу набору не входять.
Легалізація
в Европі:
EntroGen
KRAS/BRAF
набір для визначення мутацій призначений
для дослідницьких (RUO)
та діагностичних (CE - IVD)
цілей
