* Для визначення E709, L858M та L861R мутацій. Доступний при замовленні EGFR-RT52.
EGFR Мутації та рак
Рецептор до епідермального роствого фактору (EGFR) це мембранний протеїн, що відіграє центральну роль в передачі сигналів, що стимулюють ріст та проліферацію клітин. Його тирозин кіназний домен (ТК) активує деякі ланцюгові ефектори, що призводить до активації Ras-Raf-MAPK патологічних ланцюгів. Надекспресія та онкогенні мутації, що конструктивно повязані з активацією ТК домена EGFR виявлено в різноманітних солідних пухлинах. Крім того, надлишкову активацію EGFR пвязують з агресивними пухлинами та негативним прогнозом.
Процедура аналізу та тлумачення
EntroGen набір для аналізу мутацій це дослідження на основі ПЛР у реальному часі, в якому використано мутант-специфічні зонди для визначення наявності мутацій EGFR. Процедура аналізу включає три простих кроки, які тривають менше 2 годин від ДНК до отримання результату:
Ізоляція ДНК зі зразків пухлини, з фіксованих у формаліні, залитих у парафін зрізів, зразків замороженої пухлини або пухлинних клітинних ліній.
ПЛР виконується з реагентами, що входять до складу набору.
Ампліфікація (8 реакцій на зразок) та детекція з використанням ПЛР ампліфікатора у реальному часі.
Специфікації
EntroGen EGFR набір для аналізу мутацій визначає такі мутації:
Eкзон 18
G719A – 2156G>C
G719S – 2155G>A
G719C – 2155G>T
G719D – 2156G>A
Eкзон 20
T790M – 2369C>T
S768I – 2303G>T
2307-2308 ins GCCAGCGTG
2319-2320 ins CAC
2310-2311 ins GGT
Eкзон 19
2235-2249 del 15
2235-2252>AAT del 18
2236-2253 del 18
2237-2251 del 15
2237-2254 del 18
2237-2255>T del 19
2236-2250 del 15
2238-2255 del 18
2238-2248>GC del 11
2238-2252>GCA del 15
2233-2247 del 15
2234-2248 del 15
2235-2246 del 12
2235-2248>AATTC
2235-2251>AATTC
2235-2252>AAT
2235-2255>AAT
2236-2248>AGAC
2236-2248>CAAC
2236-2256 del 21
2237-2252>T
2239-2247 del 9
2239-2256 del 18
2239-2248>C del 10
2239-2258>CA del 20
2240-2251 del 12
2240-2257 del 18
2240-2254 del 15
2239-2251>C del 13
2237-2253>TC
2237-2253>TTCCT
2237-2253>TTGCT
2237-2256>TC
2237-2256>TT
2237-2257>TCT
2238-2252 del 15
2239-2252>CA
2239-2253 del 15
2239-2256>CAA
2239-2257>T
2239-2262 del 24
2246-2260 del 15
2248-2273>CC
2252-2275 del 24
2252-2276>A
2252-2277>AT
2253-2276 del 24
2254-2277 del 24
Eкзон 21
L858R – 2573T>G
L861Q – 2582T>A
EntroGen EGFR розширений набір для визначення таких EGFR мутацій:
Eкзон 18
E709
Eкзон 20
L858M
L861R
Обмеження
EntroGen EGFR набір для аналізу мутацій потребує 40-80 нанограмів геномної ДНК (5-10 нанограмів на реакцію) та здатен визначити мутацію у кількості менше ніж 1%. Ця чутливість великою мірою залежить від поширення фрагментації та якості ізольованої ДНК.
Обладнання та матеріали
EntroGen EGFR набір для аналізу мутацій потребує ПЛР ампліфікатора у реальному часі здатного до деткції FAM та VIC флуоресцентних зондів.
Цей набір включає реагенти, необхідні для ПЛР ампліфікації/детекції, валідовані реакційні контролі. Колонки та реагенти для ізоляції ДНК не включено.
